SELEÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE PEPTÍDEOS LIGANTES A PROTEÍNAS TECIDUAIS DO CÂNCER DE MAMA POR PHAGE DISPLAY
Resumo
O câncer de mama é uma das principais causas de morte em mulheres e ainda não existem medidas específicas de prevenção primária. A detecção precoce é o objetivo principal, visando à diminuição da mortalidade e aumento da sobrevida. Nesse trabalho foi utilizada a técnica de Phage Display para isolar peptídeos ligantes às proteínas do tecido câncer de mama para obtenção de biomarcadores que possam ser utilizados no diagnóstico e tratamento dessapatologia. Para seleção desses peptídeos foi realizado um Bioppaning subtrativo, no qual duas bibliotecas de peptídeos Ph.D.-7 e Ph.D.-12 expressas na superfície de fago filamentoso M13 foram colocadas primeiramente em contato com proteínas de tecido de mama normal, para que os fagos ligantes
a proteínas do tecido normal fossem eliminados nessa etapa, e depois foram submetidas a três ciclos de seleção. O DNA dos fagos selecionados foi seqüenciado e traduzido. As seqüências peptídicas selecionadas foram analisadas por bioinformática e pelas técnicas ELISA, dotblotting, wertern-blotting eimunohistoquímica para confirmar o sucesso da estratégia de seleção e para fornecer novos subsídios quanto aos prováveis alvos biológicos. A análise
imunohistoquímica foi realizada com seis dos fagos selecionados (BC04, BC05, BC07, BC11, BC12, BC17) em câncer de mama e com a mistura de três deles (BC11, BC12, BC17), em câncer de mama, câncer de ovário, linfoma não-hodgkine melanoma. Todos os fagos selecionados apresentaram alto grau de informação e Razão do Indice ELISA acima de 1, o que é considerado significativo. Tanto em Dot-blotting quanto em wertern-blotting, os fagos se ligaram apenas a proteínas do tumor. Na imunohistoquímica pode-se observar marcação apenas de células tumorais. A mistura de fagos reconheceu proteínas do câncer de mama, câncerde ovário e linfoma maligno não-Hodgkin e não reconheceu proteínas do melanoma. Três fagos selecionados, BC04, BC05 e BC07 marcaram especificamente a parede vascular de células tumorais. Os fagos selecionados nesse trabalho podem, em um futuro próximo, ser utilizados
como biomarcadores teciduais, podendo ajudar tanto no diagnóstico, quanto no tratamento do câncerde mama. O elevado grau de informação de cada peptídeo selecionado obtido pelas análises de bioinformática e os resultados obtidos nos testes ELISA, Dot- blotting, Westernblotting e imunohistoquímica validam os dados de bioppaning subtrativo e comprovam a eficiência da técnica de Phage Display.
