SELEÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE PEPTÍDEOS LIGANTES A PROTEÍNAS DO SORO DE MULHERES COM CÂNCER DE MAMA POR PHAGE DISPLAY
Resumo
No Brasil, o câncer de mama é a patologia maligna mais frequente na população feminina e tem o seu quadro agravado pelo fato do diagnóstico ser estabelecido, na maioria das vezes, em fase tardia da doença. Nesse trabalho foi utilizada a técnica de Phage Display para isolar peptídeos ligantes às proteínas do soro de mulheres com câncer de mama para obtenção de biomarcadores que possam ser utilizados no diagnóstico sorológico dessa patologia. Para seleção dos peptídeos foi realizado um bioppaning subtrativo utilizando uma biblioteca de peptídeos Ph.D.-12 expressa na superfície do fago filamentoso M13. A biblioteca de fagos foi colocada, primeiramente, em contato com soro de mulheres clinicamente sadias, depois em contato com soro de mulheres com doençasbenignas de mama, e por último, em contato
com soro de mulheres com câncerde mama, para que os fagos ligantes a proteínas do soro de mulheres sem a patologia ou com doença benigna fossem eliminados. O DNA dos fagos selecionados foi seqüenciado e as seqüências analisadas por bioinformática. As técnicas ELISA e dot-blotting foram utilizadas para confirmar o sucesso da seleção. Todos os clones
analisados apresentaram Razão do Índice ELISA maior do que um e alto grau de informação. A seqüência IETYESTHQSPP foi a mais frequente e apresentou alta reatividade nas análises de dot-blotting com IgGs do soro de pacientes com câncer de mama. Os clones T03, T18 e T09 apresentaram similaridade com a Ubiquitina e os clones T06, T19, T04, T10, T11, T14,
T17 com motivos Zinc Finger. O fato de diferentes clones apresentarem similaridade para um mesmo tipo de proteína sugere que diferentes motivos de uma mesma proteína podem ser epítopos reconhecidos por autoanticorpos ou que esses motivos estejam interagindo com proteínas associadas ao câncer de mama, visto que o bioppaning foi feito com soro total.
